實(shí)驗室自建檢測項目標(biāo)準(zhǔn)化的不足
LDT指由臨床實(shí)驗室自行開發(fā)的檢測項目。許多臨床實(shí)驗室開展LDT檢測的方法相似, 但仍缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)。盡管供應(yīng)商正在著手開發(fā)囊括所有針對特定待測物檢測所需的試劑、柱以及包括分析軟件在內(nèi)的“ 試劑盒” , 但大部分臨床實(shí)驗室對流動相、校準(zhǔn)措施、質(zhì)控措施以其他檢測所需組件仍采用自行研發(fā)的方式。雖然在監(jiān)管、標(biāo)準(zhǔn)化及室間比對等方面已做了一些努力, 但不同臨床實(shí)驗室間的檢測結(jié)果仍存在差異。
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缺少合適的內(nèi)標(biāo)
經(jīng)同位素標(biāo)記的“ 重” 標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)十分普遍, 其與待測物化學(xué)性質(zhì)完全相同, 但特定元素被較重的同位素所代替, 如2H、13C、15N與18O等。被替代的元素數(shù)目各異, 但待測物分子質(zhì)量的增加要求其可與標(biāo)準(zhǔn)品易于區(qū)分, 所以有必要為每個待測物都設(shè)立特定標(biāo)記內(nèi)標(biāo), 但在檢測多個待測物或仍缺乏標(biāo)記物時, 可考慮采用替代標(biāo)準(zhǔn)品。這種情況下, 標(biāo)準(zhǔn)品的化學(xué)性質(zhì)應(yīng)盡可能與待測物接近, 由于待測物洗出時存在干擾物質(zhì)會減弱MS信號, 采用同位素標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)品可部分補(bǔ)償這類離子抑制效應(yīng)。
ESI最易受到離子抑制的影響, APCI與APPI則較少受離子抑制影響。如利用色譜分辨率自無活性的異構(gòu)體表睪酮中分離出睪酮是較為困難的, 因為兩者質(zhì)量相同且質(zhì)量譜非常接近, 準(zhǔn)確定量要求一定的色譜分辨率。同樣, 隨著對不同形式維生素D檢測需求的日益凸顯, 色譜分離需進(jìn)一步努力提高分辨率。當(dāng)被測物質(zhì)量不同時可不采用色譜分離, 色譜設(shè)備供應(yīng)商已開始通過柱化學(xué)提高分辨率, 但需對儀器進(jìn)行更換, 成本較高。
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LC與GC分離所需的時間
為確保GC分析的熱穩(wěn)定性, 特別是需要進(jìn)行衍生化處理時, 會延長樣品制備的時間。
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樣品制備過程無法實(shí)現(xiàn)自動化
樣品制備需基于樣品類型、待測物、分析方法、已有設(shè)備、操作人員技術(shù)水平、各批次樣品數(shù)量、樣品制備與儀器（柱）污染間的成本/時間平衡, 因此關(guān)于何為“ 最佳” 樣品制備方法的意見尚未統(tǒng)一。血液、血漿與血清被視為最復(fù)雜的樣品基質(zhì), 需要最煩瑣的制備處理, 常需要多次蛋白沉淀與提取, 而其他液體樣品制備則較簡單, 可能僅需“ 稀釋后直接進(jìn)樣” 即可。穩(wěn)定、易行的樣品制備方法是實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定可重復(fù)的定量分析的關(guān)鍵之一。自動化樣品制備雖然備受期待, 其在高通量檢測中的前景最為開闊, 但前期開發(fā)耗時長且設(shè)備耗材費(fèi)用高昂。
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實(shí)驗室信息系統(tǒng)的限制
處理帶有批次樣品結(jié)果的電子數(shù)據(jù)表并進(jìn)行手工輸入是數(shù)據(jù)處理的限速步驟, 即便數(shù)據(jù)分析是自動化的, 但仍需人工進(jìn)行核對, 包括對檢測適應(yīng)癥、校準(zhǔn)和質(zhì)控數(shù)據(jù)的回顧以及人工核對臨床樣品峰值。
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專業(yè)人員的短缺
操作者是結(jié)果重復(fù)性及實(shí)驗室穩(wěn)定運(yùn)行的關(guān)鍵。目前, 美國的許多臨床實(shí)驗室都存在專業(yè)人員短缺的問題。臨床化學(xué)MS實(shí)驗室對人員技術(shù)水平的要求高于自動化實(shí)驗室, 需同時具備手工樣品制備、色譜及儀器日常維護(hù)能力。美國臨床化學(xué)學(xué)會（American Association for Clinical Chemistry, AACC）質(zhì)譜與分離分委會（Mass Spectrometry and Separation Sciences Division, MS3）等組織正努力在這方面提供更多的培訓(xùn)機(jī)會。
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資金問題
通常, MS分析儀及其相關(guān)設(shè)備的前期成本高昂, 一旦方法建立后單個檢測成本較低, 兩方面可相互平衡, 但如果由實(shí)驗室承擔(dān)直接或間接培訓(xùn)成本, 則花費(fèi)較大。另外, MS實(shí)驗室的技術(shù)人員尤其是LDT開發(fā)人員需接受大量培訓(xùn)來掌握豐富的經(jīng)驗、最先進(jìn)的技術(shù), 這也需要大筆資金。
MS技術(shù)的應(yīng)用雖尚未普及, 但將成為臨床實(shí)驗室的發(fā)展重點(diǎn)。三重四級桿將廣泛用于定量檢測, MALDI-TOF MS將用于成像及微生物鑒定。檢測目的、樣品及基質(zhì)情況決定了MS分析儀類型及離子化方法的選擇。樣品制備是臨床MS檢測的關(guān)鍵, 方法開發(fā)過程中要對樣品制備的速度、靈敏度及成本進(jìn)行考慮及優(yōu)化。
目前, MS檢測所面臨的挑戰(zhàn)源于多方面, 挑戰(zhàn)同時也帶來機(jī)遇：采用新的色譜分離技術(shù), 發(fā)明新的分析方法, 發(fā)現(xiàn)需要檢測的新分子, 發(fā)布影響臨床MS技術(shù)應(yīng)用的新規(guī)定等。儀器的速度不斷加快, 靈敏度不斷提升, 驅(qū)動著這一最激動人心的創(chuàng)新領(lǐng)域不斷發(fā)展。新一代儀器不斷涌現(xiàn), 色譜技術(shù)也進(jìn)入復(fù)興中, 其他類型MS技術(shù)的改進(jìn)顯著提升了TOF及軌道阱MS分析儀在定量檢測中的適用性。
臨床MS檢測的潛力不可限量, 但也充滿挑戰(zhàn)。希望這篇綜述能幫助你對MS設(shè)備及進(jìn)樣系統(tǒng)的現(xiàn)狀有所了解, 為臨床應(yīng)用與決策提供指導(dǎo)。